細(xì)胞培養(yǎng)基的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法：

　　澄清度

　　水是細(xì)胞培養(yǎng)基的溶劑。細(xì)胞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分只有*溶解于水才能被細(xì)胞吸收攝取，細(xì)胞才能生長(zhǎng)增殖，因此細(xì)胞培養(yǎng)基是否溶解以及培養(yǎng)液是否透明澄清直接影響培養(yǎng)基使用。該項(xiàng)目是通過(guò)對(duì)水溶解后的細(xì)胞培養(yǎng)基的澄清度檢查，判斷細(xì)胞培養(yǎng)基的澄清度。 按中華人民共和國(guó)藥典2005年版二部附錄Ⅸ B進(jìn)行。

　　pH 值

　　哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)需要合適的酸堿度，pH過(guò)高或者過(guò)低都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。pH值的測(cè)定也可以檢查細(xì)胞培養(yǎng)基的批間差。清大天一標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定取規(guī)定量供試品，用注射用水（水溫20℃-30℃）溶解至1L，加入規(guī)定量碳酸氫鈉到上述溶液中，用與細(xì)胞培養(yǎng)基溶液pH值相近的兩點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校準(zhǔn)后的酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。按中華人民共和國(guó)藥典2005年版二部附錄Ⅵ H進(jìn)行；加入規(guī)定量的碳酸氫鈉到上述溶液中，按中華人民共和國(guó)藥典2005年版二部附錄Ⅵ H進(jìn)行

　　干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

　　細(xì)胞培養(yǎng)基具有吸濕性，在空氣中放置水分會(huì)很快升高，干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示產(chǎn)品中含濕量。細(xì)胞培養(yǎng)基是有菌制劑，其豐富的營(yíng)養(yǎng)成分有利于微生物生長(zhǎng)，控制細(xì)胞培養(yǎng)基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持細(xì)胞培養(yǎng)基的養(yǎng)分。按中華人民共和國(guó)藥典2005 年版二部附錄Ⅷ L 干燥失重測(cè)定法進(jìn)行。

　　滲透壓

　　溶劑通過(guò)半透膜由低濃度向高濃度溶液擴(kuò)散的現(xiàn)象稱(chēng)為滲透，阻止?jié)B透所需施加的壓力，稱(chēng)為滲透壓。細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中，動(dòng)物細(xì)胞借助K＋、Na＋維持滲透平衡。大多數(shù)細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過(guò)高容易使細(xì)胞脫水wei縮，培養(yǎng)液滲透壓過(guò)低容易使細(xì)胞膨脹破裂，因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍。按中華人民共和國(guó)藥典2005 年版二部附錄Ⅸ G 滲透壓摩爾濃度測(cè)定法進(jìn)行。

　　細(xì)菌內(nèi)毒素

　　細(xì)菌內(nèi)毒素是許多病原性細(xì)菌所產(chǎn)生的毒素。它的特殊性在于不是細(xì)菌或細(xì)菌的代謝產(chǎn)物，而是細(xì)菌死亡或解體后才釋放出來(lái)的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養(yǎng)基細(xì)菌內(nèi)毒素過(guò)高，對(duì)生物制品疫苗（如狂犬、乙肝疫苗）、基因工程藥品等注射用的藥品都需要檢查細(xì)菌內(nèi)毒素。 因此本項(xiàng)目的檢驗(yàn)符合生物制品質(zhì)量控制要求。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)定為＜10 EU/ml。稱(chēng)取本品規(guī)定量（見(jiàn)表4-12）的1/100，加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水10 mL溶解，吸取該溶液0.1 mL加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水3.9 mL，混勻即得試樣。按中華人民共和國(guó)藥典2005 年版二部附錄Ⅺ E 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中的凝膠法進(jìn)行。

　　微生物限度

　　細(xì)胞培養(yǎng)基不是無(wú)菌產(chǎn)品，其中的微生物在一定條件下會(huì)吸收細(xì)胞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)基變質(zhì)失效。控制細(xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌，是延長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華人民共和國(guó)藥典》2005版二部附錄第100頁(yè)的口服給藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，并嚴(yán)于該標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的細(xì)菌數(shù)每1g不得超過(guò)200個(gè)，霉菌數(shù)每1g不得超過(guò)50個(gè)。

　　稱(chēng)取樣品1 g，加入無(wú)菌純化水10 mL溶解，混勻即得試樣。按中華人民共和國(guó)藥典2005年版二部附錄Ⅺ J 微生物限度檢查法進(jìn)行，檢查項(xiàng)目為細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。

　　細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn)

　　這是一個(gè)性能特性表述的要求。細(xì)胞培養(yǎng)基的功能就是培養(yǎng)哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞，因此經(jīng)過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)效果的檢驗(yàn)是產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的直觀表述，這也是很多生物制藥用戶(hù)要求的一項(xiàng)指標(biāo)。目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)和計(jì)數(shù)的法定方法，可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)》中細(xì)胞計(jì)數(shù)fa論述的內(nèi)容給出。按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)配制培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，前四天用含10％小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù)，檢查細(xì)胞培養(yǎng)基是否有促生長(zhǎng)的能力。后三天用不含小牛血清的培養(yǎng)液維持培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù)，檢查細(xì)胞培養(yǎng)基中是否有不利細(xì)胞生長(zhǎng)的毒素。本試驗(yàn)用細(xì)胞為VERO細(xì)胞。

　　細(xì)胞培養(yǎng)液的儲(chǔ)存，細(xì)胞培養(yǎng)液的儲(chǔ)存條件一般為2－8℃、密閉、避光保存，但要注意如下幾點(diǎn)：

　　1） 過(guò)濾后的*培養(yǎng)液，即添加了血清、谷氨酰胺、抗生素等的培養(yǎng)液要盡快使用，一般在2－3周內(nèi)使用完。培養(yǎng)液中的L-谷氨酰胺是不穩(wěn)定的，不同溫度L－谷氨酰胺的降解。

　　2） 滅菌后的未加L-谷氨酰胺等添加劑的培養(yǎng)基溶液，一般可在4℃保存6～9個(gè)月，也可冷凍保存，用時(shí)解凍

　　3） 高壓除菌后的培養(yǎng)基應(yīng)置4℃保存，不能因?yàn)槠淇赡褪芨邷囟雎詢(xún)?chǔ)存溫度。

　　4） 添加某些生長(zhǎng)因子、激素等添加物，可能會(huì)改變培養(yǎng)液的儲(chǔ)存條件，比如溫度、時(shí)間等方面的要求