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關(guān)于新藥研發(fā)中 宿主細胞蛋白 那些事

更新時間:2021-06-25

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宿主細胞是生產(chǎn)諸如重組蛋白、抗體和疫苗類藥物的上游材料,不同用途的藥物會采用不同的宿主細胞,重組蛋白類藥物常用的細胞有中國倉鼠卵巢細胞(CHO),新型疫苗常采用非洲綠猴腎細胞(Vero)、犬腎細胞 (MDCK)、昆蟲細胞、人二倍體細胞,傳統(tǒng)疫苗還會采用大腸桿菌、雞胚等作為宿主細胞。

宿主細胞蛋白如果殘留在藥物制劑中,會引起人體的免疫應(yīng)答——過敏反應(yīng),如:發(fā)熱、水腫,甚至休克等。人體的免疫應(yīng)答性質(zhì)和效果,會受到HCPs的濃度、數(shù)量和個體免疫系統(tǒng)差異影響而不同。藥物監(jiān)管部門最關(guān)注患者用藥的安全性,所以HCPs的監(jiān)控變得越來越重要。作為藥企來說,藥物研發(fā)周期很長,成功率也很低,投入和產(chǎn)出不是直接劃等號的,因此在藥品研發(fā)的中后期,藥企也會非常關(guān)注生產(chǎn)工藝設(shè)計過程中HCPs的控制。因為,藥物中HCPs殘留量會影響臨床試驗效果,國外曾有報道,由于藥企開發(fā)的新藥在臨床實驗中出現(xiàn)免疫反應(yīng),導致臨床實驗推遲、擱置或重新設(shè)計工藝,如:易普森公司,凝血因子9(IB1001) 臨床實驗在2012年被擱置,2017才獲批。

藥品即使被成功開發(fā),但如果想進入不同國家的市場,還要達到當?shù)厮幬锉O(jiān)管部門的標準,所以藥企都會遵照不同國家藥典要求,嚴格建立HCP監(jiān)控體系。中華人民共和國藥典2010年版第三部就明確規(guī)定CHO細胞殘余蛋白占總蛋白含量要小于0.05%以下;對Vero細胞殘余蛋白會隨不同產(chǎn)品而異,ELISA方法檢測法每個劑量不高于2微克或4微克。美國FDA認為可以接受的范圍為1-100/100萬,即1-100個PPM。

當前,廣泛被使用于HCP檢測的方法是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)。在藥物研發(fā)中,通常會建立通用和專屬的HCP ELISA方法。前期可以采用通用HCP ELISA試劑盒。到臨床實驗時,藥企會采用專屬試劑盒,即工藝特異HCP ELISA試劑盒,需要單獨純化HCP蛋白,免疫篩選抗體。

 

 

HCP ELISA的原理是先將HCP抗體包被酶標板,孵育待測樣品,通過HCP抗體捕獲和富集樣品中HCPs,再加入與包被酶標板的抗體種屬不同的,酶聯(lián)報告基團的HCP抗體,結(jié)合已被富集的HCPs,通過底物顯色或熒光的方式成像,最終定量計算HCPs。

 

HCP ELISA的方法具有特異性強、靈敏度高、通量大和使用方便等特點,但也存在風險:

ELISA方法能夠富集的HCPs至少要具有兩個及以上的表位。

當兩個表位被抗體結(jié)合時,不能存在空間位阻。

ELISA酶標板包被的抗體結(jié)合量低,會限制HCP檢出限。

不是所有HCPs都可以作為抗原產(chǎn)生抗體,因此會有“漏檢”,所以需要評估HCP ELISA抗體的覆蓋率(Coverage)。

 

 

Cygnus HCP測定法被用作行業(yè)的參考方法,或支持商業(yè)化生物制劑的制造和質(zhì)量控制(QC),因此其質(zhì)量聲譽享譽業(yè)界和監(jiān)管機構(gòu)。

各種細胞系用于生產(chǎn)治療性單克隆抗體和重組蛋白,下一代重組疫苗以及用于細胞和基因療法的病毒載體。Cygnus為幾乎所有表達平臺提供HCP ELISA。BHK HCP ELISA,HEK293 HCP ELISA,PER.C6 ® HCP ELISA,非洲綠猴腎細胞HCP ELISA,將HeLa HCP ELISA,CHO HCP ELISA 3G,NS / 0 HCP ELISA,SP2 / 0 HCP ELISA,大腸桿菌HCP ELISA,巴斯德畢赤酵母HCP ELISA和其他細胞系HCP ELISA用于治療性單克隆抗體和重組蛋白生產(chǎn)的過程開發(fā)和最終產(chǎn)品質(zhì)量控制。

 

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